روش تهیه نمونه مورد برسی برای مطالعه با میکروسکوپ نوری
بسمه تعالی
روش تهیه نمونه مورد برسی برای مطالعه با میکروسکوپ نوری
الف) مطالعه ی سلول زنده
اشیائی که با میکروسکوپ نوری مطالعه می شوند بایستی ضخامتی در حدود 5 میکرون داشته باشند . به همین علت برای مطالعه یک شیئی با میکروسکوپ نوری در درجه اول از تک یاخته ها یا بافت هایی با یک لایه سلول استفاده میشود .
از بافت های ضخیم بایستی مقاطع نازک و مناسب تهیه کردد به نحوی که حداقل یک طبقه سلول بدون آسیب باقی بماند . مقاطع در مایعی که غلظت آن شبیه محیط طبیعی سلول می باشد روی لام قرار گرفته و با یک لامل پوشانده میشود .
برای مشاهده ی بهتر سلول های زنده رنگ آمیزی لازم است که طی این عمل سلول های زنده رنگ ها را بدون تأثیر سمی تا مدتی تحمل می نمایند . برای رنگ آمیزی حیاتی دو شرط اساسی زیر باید موجود باشد :
1) ماده باید بتواند در سلول نفوذ نماید" یعنی غشا های سلولزی و سیتوپلاسمی سلول بایستی برای ماده رنگی قابل نفوذ باشند .
2) باید ماده رنگی در سلول جمع گردد . برای ذخیره شدن رنگ در سلول چند راه وجود دارد :
الف) ترکیب شیمیایی ب) ترکیب به روش جذب الکتریکی ج) ذخیره محلول
چنانچه سلول بمیرد می توان آن را غالباً در اثر تغییر رنگ بوجود آمده تشخیص داد .
ب) مشاهده سلول های ثابت شده
یک بافت به دو روش ثابت میشود :
الف) یکی از راه های ثابت کردن به طریقه فیزیکی است که نمونه را منجمد کرده و یا سریع حرارت می دهند .
ب) ثابت کردن شیمیایی که از اهمیت بیشتری برخوردار است . در این روش سلول ها می میرند . برای ثابت کردن شیمیایی بافت در درجه اول از موادی استفاده می شود که ( باتوجه به تأثیر روی پروتئن ها ) باعث انعقاد یا عدم انعقاد آنها می گردد . در گروه اولاز الکل و اسید پیریک می توان نام برد . با توجه به اینکه این مواد محتویات سلول را تا حد زیادی متلاشی می کنند لذا زمانی باید مورد استفاده قرار گیرند که اندازه و محل سلول های مختلف نسبت به همدیگر بدون توجه به محتویات هدف مطالعه باشند .
گروه دوم که تأثیرانعقادی ندارند مانند آلدئید ها و تترا اکسید اسمیوم که محتویات سلول باقی مانده و از این نظر برای مطالعه سلول مورد استفاده قرار میگیرند .
با احترام سرگروه ناحیه 2 قزوین صفایی